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M15(pREP4) 感受态细胞
价格 品牌
面仪 mlBio
  • 产地:上海
  • 货号:ML-G2062
  • 发布日期: 2019-08-29
  • 更新日期: 2022-06-07
产品详请
产地 上海
品牌 mlBio
货号 ML-G2062
用途范围 科研实验
纯度 %
CAS编号
规格 10×100μl 50×100μl
是否进口

M15(pREP4) Chemically Competent Cell说明书


产品货号: ML-G2062                      


保存条件:
-80℃   


产品规格: 
10×100μl  50×100μl


产品介绍

基因型               

F-, Φ80ΔlacM15, thi, lac-, mtl-, recA+, KmR


简要说明

M15(pREP4)蛋白表达菌株含有pREP4质粒,该质粒通过p15A复制子启动复制,可以与许多原核表达质粒共存于同一大肠杆菌细胞中;同时该质粒携带lac I基因,可高效表达lac 抑制蛋白,在IPTG诱导前可抑制目标蛋白的本底表达,特别适合毒性基因的表达。

M15(pREP4)菌株是PQE系列质粒的配套菌株,特别适合PQE系列质粒或由E.coli T5 启动子诱导表达的质粒的蛋白表达。pREP4质粒赋予该菌株卡那霉素抗性。MLBio生产的M15(pREP4)感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达2×108cfu/μg DNA。


操作说明

1. M15(pREP4)感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。


2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。


3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。


4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取50 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上(若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。


5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。M15(pREP4)菌株在平板或液体培养基中生长时,需在培养基中加入终浓度为35ug/ml的卡那霉素。


注意事项

1. 感受态细胞*在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。


2. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。


3. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。


4. 为获得需要量的蛋白,*诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。


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