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BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞
价格 品牌
面仪 mlBio
  • 产地:上海
  • 货号:ML-G27015
  • 发布日期: 2019-08-29
  • 更新日期: 2022-06-07
产品详请
产地 上海
品牌 mlBio
货号 ML-G27015
用途范围 科研实验
纯度 %
CAS编号
规格 10×100μl 50×100μl
是否进口

BL21 Star(DE3)pLysSChemically Competent Cell说明书


产品货号:
ML-G27015                     


保存条件: -80℃                   


产品规格:  10×100μl  50×100μl        


产品介绍

基   因   型
F- ompT hsdSB(rB- mB- ) gal dcm rne131 (DE3)pLysS (CamR)


简  要  说  明

BL21Star(DE3)pLysS 菌株来源于BL21(DE3),含有 rne131 突变(RNaseE基因),RNaseE 基因的突变降低了內源RNase 的积累,增强菌株细胞内mRNA 的稳定性,从而提高异源蛋白的表达水平。-MLBio


主要适用于T7 启动子表达载体(如 pET系列)的高水平蛋白表达,同时含有大肠杆菌 RNA聚合酶,也可用于非T7 启动子表达载体(pGEX,pMAL等)的蛋白表达。

由于 BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高,所以不适合毒性蛋白的表达。-MLBio

BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带pLysS 质粒,具有氯霉素抗性。pLysS 含有表达 T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌,还可与 T7 RNA 聚合酶结合抑制其转录活性,进而降低目的基因的背景表达水平,但不干扰IPTG 诱导的表达。

pLysS 质粒含有 p15A 复制起始子,可以和含有 pUC或 pBR322 等复制起始子的质粒兼容。Bio-BL21Star(DE3) pLysS感受态细胞由特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。


操  作  说  明

1. Bio-BL21Star(DE3) pLysS感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。


2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。


3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT 或 LB),混匀后37℃, 200 rpm 复苏60 分钟。


4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。

5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注 意 事 项

1. 感受态细胞*在冰中缓慢融化,插入冰中8 分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。


2. 混入质粒时应轻柔操作。


3. 转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。


4. 诱导时,IPTG浓度可选(0.1-10 mM均可)。


5. 为获得需要量的蛋白,*诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。

BL21 Star(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有 34μg/ml 氯霉素,以防质粒丢失。


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