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ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞
价格 品牌
面仪 mlBio
  • 产地:上海
  • 货号:ML-G2023
  • 发布日期: 2019-08-29
  • 更新日期: 2022-06-07
产品详请
产地 上海
品牌 mlBio
货号 ML-G2023
用途范围 科研实验
纯度 %
CAS编号
规格 10×100μl 50×100μl
是否进口

ArcticExpress (DE3) pRARE2 Chemically Competent Cell说明书


产品货号: ML-G2023                    


保存条件: -80℃   


产品规格 :  10×100μl  50×100μl        


产品介绍

基因型

E.coli B F– ompT hsdS(rB– mB–) dcm+ TetR gal λ(DE3) endA Hte [cpn10cpn60 GentR] pRARE2 (CamR)


简要说明

MLBio的 ArcticExpress (DE3) pRARE2来源于ArcticExpress (DE3),将具有氯霉素抗性的pRARE2质粒导入ArcticExpress (DE3)细胞中即是ArcticExpress (DE3) pRARE2。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株染色体DNA中整合了λ噬菌体DE3区,使得ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株可同时表达T7 RNA聚合酶和


大肠杆菌RNA聚合酶,广泛用于pET系列,pGEX,pMAL等质粒的蛋白表达。ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株具有四环素,庆大霉素,氯霉素抗性,endA1突变有利于质粒DNA的稳定。


[cpn10cpn60 GentR]的存在使ArcticExpress (DE3) pRARE2可以表达适应低温的伴侣蛋白Cpn10和Cpn60(来自嗜冷菌—Oleispira antarctica)。Cpn10和Cpn60伴侣蛋白在4-12℃表现出较高活性,在ArcticExpress(DE3) pRARE2细胞中表达时,可降低重组蛋白包涵体的形成,增加可溶重组蛋白的表达量及生物活性,比传统的原核表达伴侣蛋白GroEL、GroES等具有更加优异的促融能力。


同时,pRARE2质粒可补充大肠杆菌缺乏的7种稀有密码子(AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA和CGG)对应的tRNA,提高外源基因的表达水平。MLBio生产的ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞经特殊工艺制作,pUC19质粒检测转化效率达108cfu/μg DNA。


操作说明

1. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的质粒,并用手拨打EP管底混匀,冰中静置25分钟。


2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。


3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟。


4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的LB培养基上((平板中务必同时含有34ug/ml的氯霉素,40ug/ml的庆大霉素和转化质粒本身的筛选抗生素;若质粒浓度较高,也可稀释后涂板,务必保证能在平板上挑到单克隆菌落)。


5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。


注意事项

1. 感受态细胞*在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。


2. ArcticExpress (DE3) pRARE2菌株携带 pRARE2质粒,除复苏培养基为无抗生素外,其余所用培养基、培养液均应含有34 μg/ml氯霉素、40ug/ml的庆大霉素,以防质粒丢失。


3. 为获得需要量的蛋白,*诱导时间,温度,IPTG浓度需实验者优化。


4. ArcticExpress (DE3) pRARE2感受态细胞具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性,不可用于具有四环素、庆大霉素、氯霉素抗性质粒的转化。


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